FAQ1: 在溶解AbA時，可以用DMSO（二甲基亞砜）么？

答：不能，需要用無水乙醇。

FAQ2: 膜體系文庫篩選，做自激活檢測的時候，陰性對照為什么在三缺四缺也正常生長？

答：如果只是輕微生長是有可能的，膜體系系統(tǒng)中的陰性對照，有時候由于菌的活力太強，培養(yǎng)時間太久，涂板的菌液量大等原因，導(dǎo)致在三缺、四缺上會有輕微生長，但長勢會明顯弱于陽性對照，只要功能驗證生長正常，沒有自激活，就可以進行后續(xù)篩庫。

FAQ3: 如何驗證一個蛋白是否具有轉(zhuǎn)錄激活活性？ 
答：通過酵母文庫系統(tǒng)來做，可以將目的基因連接到pGBKT7載體，然后直接轉(zhuǎn)入雙雜篩選的菌株Y2HGold，但是不加AD載體。如果能在篩選培養(yǎng)基上活下來，就表明該目的基因具有類似AD的轉(zhuǎn)錄激活作用。

FAQ4: 擬南芥全長轉(zhuǎn)錄因子庫，雙雜和單雜誘餌載體及菌株分別是用什么？

答：雙雜 BD 載體可用 pDEST32、菌株用 Y2HGold；單雜 BD 載體 用pHISi-1、菌株 用YM4271。

FAQ5: 如果研究的誘餌蛋白亞細(xì)胞定位在線粒體上，用核體系酵母文庫還是膜體系酵母文庫篩選比較好？

答：可以先嘗試用膜系統(tǒng)酵母文庫篩選，但前提該蛋白須有一個末端在細(xì)胞質(zhì)里。

FAQ6: PlantCare網(wǎng)站是預(yù)測植物啟動子的結(jié)構(gòu)原件，是否可以預(yù)測昆蟲或者其他動物的？

答：理論上不行，但是都是預(yù)測軟件可以參考使用。

FAQ7：在做自激活檢測的時候，為什么平板的克隆大小不均一？

答：克隆生長密度和生長時間都會讓克隆大小不均一，生長稀疏的地方營養(yǎng)豐富，克隆會偏大，但是不影響結(jié)果判斷。

FAQ8: 做核體系酵母單雜篩選的時候，一般啟動子區(qū)域如何選擇？串聯(lián)3次的結(jié)構(gòu)元件篩選是不是自激活更容易抑制？

答：經(jīng)過大量單雜篩選實驗，經(jīng)驗告知我們啟動子的長短選擇對于本身的自激活現(xiàn)象，兩者本身沒有直接的線性關(guān)系，具體的選擇可能還是取決于我們后期主要研究的序列。

FAQ9: 核體系單雜篩選的空載pAbAi為什么不能用作陰性對照？又為什么連了目的片段自激活就可以抑制�。�

答：第一：空載pAbAi本身是有自激活, 第二：外源片段可以破壞掉多克隆位點區(qū)域的序列

FAQ10:做酵母文庫雙雜篩選實驗中，為什么后續(xù)篩到陽性克隆，進過測序發(fā)現(xiàn)陽性克隆序列與誘餌載體BD的序列是相同的？

答：實驗中是有這種現(xiàn)象的，因為有的蛋白會以二聚體的形式進行互作。