膜體系酵母雙雜交篩選原理：

膜體系文庫篩選原理：若文庫蛋白X和誘餌蛋白Y共同轉(zhuǎn)到NMY51菌株中，兩者互作會形成完整的泛素，從而被UBPS識別進(jìn)行剪切，剪切下來的LexA-VP16(人工轉(zhuǎn)錄因子TF)，從而激活下游報(bào)告基因。

膜體系誘餌載體如何選擇？

膜體系酵母雙雜交體系中根據(jù)誘餌蛋白質(zhì)定位不同，需要選用不同的載體，以便于誘餌蛋白相連接的Cub-LexA-VP16和文庫蛋白相連的泛素NubG相互作用。

具體以pBT3-SUC示例如下：

步驟1：通過https://www.novopro.cn/tools/translate.html 網(wǎng)站使CDS序列翻譯為氨基酸序列，如圖所示：

步驟2：通過https://services.healthtech.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/  網(wǎng)站預(yù)測誘餌蛋白有否有跨膜結(jié)構(gòu)域，如圖所示該蛋白具有明顯的跨膜結(jié)構(gòu)域。

步驟3：通過http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/ 網(wǎng)站預(yù)測誘餌蛋白是否具有明顯的信號肽，如圖所示該蛋白N端存在信號肽。

步驟4：通過 http://smart.embl-heidelberg.de 網(wǎng)站預(yù)測誘餌蛋白存在的已知結(jié)構(gòu)域，方便當(dāng)該誘餌存在自激活時(shí)使用不同結(jié)構(gòu)域篩庫，如圖所示該蛋白存在結(jié)構(gòu)域。

綜上所述：該蛋白有擴(kuò)膜結(jié)構(gòu)域，N端有信號肽，建議用pBT3-SUC載體篩膜體系文庫。

膜體系酵母雙雜交篩選步驟：

步驟1：誘餌載體構(gòu)建；步驟2：誘餌載體功能驗(yàn)證；步驟3：自激活及毒性檢測；步驟4：酵母文庫初篩；步驟5：對初篩結(jié)果進(jìn)行復(fù)篩；步驟6：一對一驗(yàn)證；步驟7：點(diǎn)板驗(yàn)證。篩選步驟詳情請聯(lián)系當(dāng)?shù)劁N售或者掃描添加源寶微信號咨詢。

源寶生物：

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