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详细说明

酵母雙雜交篩選系統(tǒng)(蛋白/蛋白互作)

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服務(wù)詳情

 

(一)核體系雙雜篩選

通過(guò)轉(zhuǎn)錄活化蛋白結(jié)合DNA上特異的序列而啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄反應(yīng),轉(zhuǎn)錄活化蛋白分別由相互獨(dú)立的DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(BD)和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(AD),通常情況下BD可以與GAL4上游活化序列(GALUAS)結(jié)合但不能引起轉(zhuǎn)錄,單獨(dú)的AD也不能與GALUAS結(jié)合,只有當(dāng)BD與AD分別表達(dá)的融合蛋白發(fā)生相互作用,兩者在空間上相互靠近才能與GALUAS結(jié)合并且引起報(bào)道基因的轉(zhuǎn)錄。

圖片2.jpg

專業(yè)服務(wù)優(yōu)勢(shì):

A、文庫(kù)選擇優(yōu)勢(shì):

   1.定制一庫(kù)四用(單雜、雙雜、三雜、過(guò)表達(dá)載體文庫(kù))的特色酵母文庫(kù):使用優(yōu)化后的clonetech的pGADT7-Rec2、GATEWAY二次重組法和“一步法重組”文庫(kù);

   2.提供商品化酵母cDNA文庫(kù)。

B、篩選服務(wù)優(yōu)勢(shì):

酵母核體系雙雜交系統(tǒng)可研究蛋白與蛋白二元之間的相互作用方式,篩選步驟優(yōu)化,具有成熟的實(shí)驗(yàn)操作流程,提供真實(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及原始圖片。

C、篩選后可同時(shí)進(jìn)行高通量篩選Y2H-seq。

 

服務(wù)詳情: 

服務(wù)步驟

周期(工作日)

交付材料

價(jià)格

A、載體構(gòu)建

15-20

1、誘餌質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果
2、檢測(cè)圖片
3、初篩圖片
4、復(fù)篩圖片
5、測(cè)序及分析結(jié)果+陽(yáng)性克隆菌液
6、驗(yàn)證圖片+驗(yàn)證的AD質(zhì)粒
7、驗(yàn)證圖片
8、項(xiàng)目報(bào)告

詢價(jià)

B、自激活檢測(cè)

10-15

C、初篩

15-20

D、復(fù)篩

E、陽(yáng)性克隆測(cè)序

F、一對(duì)一驗(yàn)證

15-20

G、點(diǎn)板驗(yàn)證

H、項(xiàng)目結(jié)束


(二)膜體系雙雜篩選:

利用分離的泛素系統(tǒng)(split-ubiquitin)進(jìn)行跨膜蛋白相互作用的篩選。分離的泛素系統(tǒng)由N 端(Nub)和C 端(Cub)組成,通常兩者具有很強(qiáng)的親合力,可表現(xiàn)出野生型泛素的功能。現(xiàn)將Nub的3位異亮氨酸突變?yōu)楦拾彼幔∟ubI 突變?yōu)?nbsp;NubG),降低與Cub 的親合力;同時(shí)將 Cub 部分與人工合成的 LexA 轉(zhuǎn)錄激活因子融合成一個(gè)融合蛋白Cub-LexA;z后將要驗(yàn)證的蛋白質(zhì)分別與 NubG 和 Cub-LexA融合,形成 bait 融合蛋白(bait-cub-LexA)和 prey 融合蛋白(prey-NubG),如果 bait 和 prey 發(fā)生相互作用,即 NubG 和 Cub 的相互接近,會(huì)被UBPs 識(shí)別,使 LexA 切割,進(jìn)入核內(nèi)從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。


7.jpg

8.jpg

服務(wù)詳情:

服務(wù)步驟

周期(工作日)

交付材料

價(jià)格

A、載體構(gòu)建

15-20

1、誘餌質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果
2、自激活檢測(cè)及功能驗(yàn)證圖片
3、初篩圖片
4、復(fù)篩圖片
5、測(cè)序及分析結(jié)果+陽(yáng)性克隆菌液
6、驗(yàn)證圖片+驗(yàn)證的AD質(zhì)粒
7、驗(yàn)證圖片
8、項(xiàng)目報(bào)告

詢價(jià)

B、自激活檢測(cè)

15-20

C、初篩

15-20

D、復(fù)篩

E、陽(yáng)性克隆測(cè)序

F、一對(duì)一驗(yàn)證(點(diǎn)對(duì)點(diǎn))

15-20

G、點(diǎn)板驗(yàn)證

H、項(xiàng)目結(jié)束


專業(yè)服務(wù)優(yōu)勢(shì):

A、文庫(kù)選擇優(yōu)勢(shì):

   1.定制一庫(kù)四用(單雜、雙雜、三雜、過(guò)表達(dá)載體文庫(kù))的特色酵母文庫(kù):使用優(yōu)化后的clonetech的pGADT7-Rec2、GATEWAY二次重組法和“一步法重組”文庫(kù);

   2.提供商品化酵母cDNA文庫(kù)。

B、篩選服務(wù)優(yōu)勢(shì):

酵母膜體系雙雜交系統(tǒng)可研究膜蛋白或細(xì)胞質(zhì)蛋白與蛋白二元之間的相互作用方式,篩選步驟優(yōu)化,具有成熟的實(shí)驗(yàn)操作流程,提供真實(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及原始圖片。

C、篩選后可同時(shí)進(jìn)行高通量篩選Y2H-seq。



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