載體改造：

CrY2H-seq體系中BD質(zhì)粒pDBlox和AD質(zhì)粒pADlox在ORF插入物的3 ‘端側(cè)翼含有l(wèi)ox突變位點(diǎn)（lox66和lox71）。在兩個(gè)蛋白發(fā)生互作后，AD和BD質(zhì)粒通過(guò)Cre/lox發(fā)生重組，通過(guò)AD和DB載體上的特異性引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增可鑒定融合的ORF產(chǎn)物。

篩選流程：

   1. Mating法對(duì)雙雜文庫(kù)篩選；

   2. 收集互作酵母單克��；

   3. 提取重組質(zhì)粒；

   4. 利用PCR擴(kuò)增目的片段；

   5. 構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)并高通量測(cè)序；

   6. 分析并注釋測(cè)序結(jié)果。

CrY2H-seq技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

• 簡(jiǎn)單的，低成本、高通量，對(duì)文庫(kù)無(wú)特殊要求；

• 可以構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子之間的互作網(wǎng)絡(luò)；

• 可以病原菌與宿主之間的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)；

• 可擴(kuò)展至其他酵母篩選體系統(tǒng)（Y1H和Y3H），為了解細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程提供技術(shù)支持。

應(yīng)用實(shí)例：

• 鑒定擬南芥轉(zhuǎn)錄因子互作網(wǎng)絡(luò)

（參考文獻(xiàn)：S Trigg et al. / Nature Methods 14(8) 2017 819-830）

• 鑒定病原菌與宿主互作網(wǎng)絡(luò)

（參考文獻(xiàn)：F Yang et al. / Nucleic Acids Research 46(3) 2017 e17）